仪器简介

小动物活体成像仪（品牌：美国PerkinElmer，型号：IVIS Lumina Series III）是PerkinElmer推出的二维多模式小动物活体光学成像系统。该系列整合了生物发光、多光谱荧光成像技术，支持从绿光到近红外光的全波段成像，配备多达26个滤光片及高灵敏度背部薄化科学一级CCD（工作温度低至-90℃），可检测小鼠皮下单个生物发光细胞，适用于肿瘤转移、感染分布等需要解剖学定位的研究。系统搭载Living Image®专业分析软件，支持动态对比度增强成像及多角度观测，广泛应用于癌症、神经疾病、免疫学及药物研发等领域，为临床前研究提供高灵敏度、多模态的活体成像解决方案。

仪器操作流程

1.打开仪器主机电源 (机身背面左侧下方)

2.拍摄荧光还请打开荧光光源开关 (单独放在主机附近的白色小盒子,开关在背侧)

3.启动计算机

4.点击Living Imaging软件启动程序, 并点击Initialize初始化IVIS系统

5.初始化时, IVIS Acquisition Control Panel中的温度状态灯为红色, 当

温度状态灯绿色时可进行成像

Living Imaging软件操作步骤

1.将预麻醉的小鼠放入成像箱, 小鼠头部置于麻醉玻璃面罩内, 轻轻关门。

2. Control Panel中选择成像模式: Luminescent (开软件初始化后默认就是该模式)。

3.设置曝光时间,默认值为1 ,按两次向下箭头后变为Auto。

4.确保Photograph和Overlay选项被勾选(开软件初始化后默认勾选)。

5.选择成像视野大小: A/B/C/D ; A适用于小鼠局部成像, D可同时成像3只小鼠。

6.小鼠成像高度(Subject height) 保持1.50 cm (开软件初始化后默认是该值)。

7.点击Acquire按钮获取成像图片,在自动弹出的Image Labels中对图片进行命名和注释。

8.获取图片后,点击Tool Palette中的Image Adjust,将Individual勾选框去掉, 使得Color Scale可以显示出来, 点击Tool Palette中的ROI，Tools,选取Circle,Square,Free Draw或Grid进行ROI圈选

9.点击Measure ROIs, 获取ROI区域的定量数值, 对于生物发光成像, 定

量单位为Radiance (photons)

荧光序列图像 (Sequence) 获取操作步骤:

1.将预麻醉的小鼠放入成像箱,小鼠头部置于麻醉玻璃面罩内, 轻轻关门。

2. Control Panel中点击Imaging Wizard, 点击选择。

3.对于荧光成像,双击选择Fluorescence后,双击Filter Pair ,在下一步见面上方部分Name下拉菜单里选择Alphabetical里相应的荧光染料或名称,软件会自动匹配合适的激发-发射滤光片,点击Next,在弹出的窗口中选择成像物体 (Imaging Subject)和拍照参数(一般默认值为Auto) ,点击Next,然后在Control Panel中点击Acquire Sequence

4.如要进行连续动态拍摄,勾选Time Series Study,输入所需拍照数量(Total number of segments)和拍照间隔时间(Delay betweensegments)

8.获取图片后,点击Tool Palette中的Image Adjust,将Individual勾选框去掉, 使得Color Scale可以显示出来, 点击Tool Palette中的ROI，Tools,选取Circle , Square , Free Draw或Grid进行ROI圈选

9.点击Measure ROIs,获取ROI区域的定量数值,对于荧光成像,定量单位为Radiant efficiency

荧光光谱分离步骤(Manual)获取操作步骤:

1. Control Panel点击Imaging Wizard,并选择Fluorescence。

2. Fluorescence-Spec Unmix/Filter Scan窗口中选择探针类型和扫描滤光片组后点击Next,在弹出的窗口中选择成像物体(Imaging Subject)和拍照参数(一般默认值为Auto) ,点击Next,在Control Panel中点击Acquire Sequence获取序列光谱扫描图像。

3.在Tool Palette-Spectral Unmixing-Analyze中选择Manual,点击StartUnmixing。

4.用铅笔图标手动在混合光谱叠加图中画选需要光谱分离的成分: 包括背景荧光点(TissueAF)和目标信号点。

5.通过Computer the pure spectrum图标计算出目标信号的纯光谱。

6.点击Unmix,获取光谱分离成像结果。

系统关机操作

1.短时间停机(停用间隔在数小时之内) :退出关闭Living imag软件即可

2.下班停机:关闭软件,关闭电脑。

3.假期停机:关闭软件,关闭电脑,关闭主机电源。

日常使用注意事项

1.仪器工作时必须保证室内温度≤26度 (超过26度会加大像机的损耗)

2.室内相对湿度小于60% , 室内没有明显扬尘。

3.仪器使用完毕后如果停用时间大于2个小时,请将软件退出关闭。(软件退出关闭后,像机即停止工作,处于待机状态，有助于减少相机的损耗。

4.日常使用,下班后一定关闭电脑,主机可以不用断电,否则仪器凌晨2点时会启动软件拍摄背景文件。

5.为了防止电脑中病毒,不要在电脑上随意使用未经格式化的U盘。 可以使用刻录机刻录光盘转移数据。

6.实验结束后,请将样本取出,并清理载物台,保持载物台干净。

7.每三个月检查清理一次载物台下面的杂物。